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本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。典型产量0.5μg～3.5μg/拭子。

• 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
  
• 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。
  
• 配备了Poly Carrier用于充分收集特别微量DNA。
  
• 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern杂交等。

• 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
  
• 蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过25℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，-20℃保存2年。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
  
• 开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
  
• 结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

• 第一次使用前请先在15mL漂洗液WB中加入60mL无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
  
• 平衡液预处理吸附柱备用：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见“附录二：关于平衡液的使用”。

• 样本采集：
  
  • 口咽拭子样本处理方式：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭20次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入2mL离心管中，加入400μL裂解液ML。
    
    • 采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前30min内应该避免进食或者饮水。
  • 鼻咽拭子样本处理方式：将在咽部擦拭过的拭子转移到5mL离心管中，加入1mL～2mL的裂解液ML，涡旋振荡混匀。取出400μL的样品，用于后续提取。
    
  • 唾液样本处理方式：按照要求取唾液并转移至5mL离心管中，加入等体积的裂解液ML，涡旋振荡混匀。取出400μL的样品，用于后续提取。
    
  • 保存在拭子保存液中的拭子处理方式：在拭子保存液中加入1/5体积的裂解液ML。取出400μL的样品，用于后续提取。
• 再加入20μL的蛋白酶K (20mg/mL)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀。
  
• 可选步骤（一般不需要做）：56℃放置30分钟，期间每10分钟涡旋混匀10秒。
  
  • 一般情况下该步骤可以省略，除非效果不好，再尝试加做此步骤。
• 加入400μL结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。此时溶液应变清亮。
  
  • 如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组DNA产量过低于1μg，可以在400μL结合液CB中加入4μL Poly Carrier。
• 冷却后加200μL无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液滴，收集所有的液体到管底。
  如果周围环境高于25℃，乙醇需要冰上预冷后再加入。
  
• 将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）12000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液。
  
• 加入500μL抑制物去除液IR，12000rpm离心30秒，弃废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 将吸附柱AC放回空收集管中，12000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20～50μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。收集滤液，即为DNA溶液。
  
  • 洗注：可通过以下方式提高回收产量：70℃预热洗脱液；将DNA滤液再次上柱，室温放置2min后，洗脱。
• DNA可以短暂存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

• DNA产量低或者洗脱液中无DNA
  
  • Poly Carrier没有加入到结合液CB
    建议：仔细阅读注意事项4。
    
  • 样品冻融超过1次。
    建议：尽量使用新鲜样品和冻融不超过1次的样品。
    
  • 样品在室温放置过久。
    建议：尽快处理样品或者低温适当方式保存。
    
  • 裂解不完全，蛋白酶K失效了。
    建议：收到蛋白酶K后，按照每次使用量分装冻存，避免反复冻融。
    
  • 结合液CB和Poly Carrier没有充分混匀。
    建议：充分涡旋混匀。
    
  • 试剂和样品没有充分混匀。
    建议：加入每个试剂后都要充分混匀。
    
  • 洗脱效率不高。
    建议：确保做了步骤10，否则残留乙醇会影响洗脱效率，仔细阅读步骤11和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
• DNA的下游反应如PCR效果不佳
  
  • DNA产量低或者洗脱液中无DNA。
    建议：在下游反应中增加DNA用量。
    
  • 降低的灵敏度。
    建议：确定在下游PCR应用中DNA洗脱液的最大允许用量，减少或者增加DNA洗脱液在PCR反应中的用量，DNA洗脱体积也可以相应的调整。
• DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全
  
  • 离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应。
    建议：确保做了步骤10，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。
    
  • 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应。
    建议：将洗脱的基因组DNA溶液12000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。

• 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。
  
• 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μL的平衡液至柱子中。13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。